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MRG1CRISPR激活质粒(m) | sc-421714-ACT | 20 µg | $397.00 |
小鼠 Cited2 编码转录调节因子 MRG1。MRG1 是一种可与 CBP/p300 相互作用的蛋白,能够将发育信号与应激反应信号整合起来,并在不同细胞环境中以情境依赖的方式调控基因表达。Cited2 通过调节 HIF-1 依赖性通路参与与缺氧适应相关的转录程序,并通过影响调控元件处共激活因子的可用性来参与细胞命运决定。在哺乳动物系统中,CITED2 活性异常与胚胎模式建立、心血管发育以及造血调控缺陷相关,反映了其在组织并协调谱系特异性转录网络中的作用。这些特性使 Cited2/MRG1 成为研究转录可塑性、代谢应激反应以及与分化相关的基因调控回路的一个重要靶点。
MRG1 CRISPR激活质粒(m)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Cited2的表达。
MRG1 CRISPR激活质粒(m)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的Cited2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于Cited2转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性MRG1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的Cited2位点,并能够研究内源性位点上依赖于MRG1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Cited2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟MRG1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。