MRE11 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401510-ACT

MRE11 codifica uma nuclease conservada que forma o complexo MRE11–RAD50–NBN (MRN), um sensor e efetor central do reparo de quebras de dupla fita no DNA. Por meio de funções no processamento das extremidades do DNA, na sinalização de checkpoint mediada por ATM/ATR, na recombinação homóloga e na manutenção de telômeros, MRE11 ajuda a preservar a estabilidade do genoma durante estresse de replicação e desafios genotóxicos. A função alterada do MRN está associada a respostas defeituosas a danos no DNA, instabilidade cromossômica e fenótipos ligados ao câncer, e a atividade de MRE11 é frequentemente investigada em estudos de dinâmica de forquilhas de replicação e de reparo associado à cromatina. Como resultado, MRE11 constitui um nó-chave para dissecar a comunicação cruzada entre vias da DDR e os mecanismos de sensibilidade celular a perturbações que causam dano ao DNA.

MRE11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MRE11 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MRE11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MRE11 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MRE11, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MRE11. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MRE11 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MRE11 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MRE11 em células tumorais com expressão de MRE11 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.