MRCKβ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403169-ACT

CDC42BPB codifica a proteína beta de ligação ao Cdc42 relacionada à quinase da distrofia miotônica (MRCKβ), uma quinase de serina/treonina que atua a jusante das GTPases da família Rho, particularmente CDC42, para regular a contratilidade actina–miosina e a remodelação do citoesqueleto. A MRCKβ fosforila substratos como a cadeia leve da miosina e a LIMK, influenciando a formação de fibras de estresse, a dinâmica de membrana, a polaridade celular e a migração direcional. Por meio dessas funções, CDC42BPB conecta a sinalização de GTPases Rho a vias que controlam a renovação de adesões e mudanças morfogenéticas. A atividade desregulada de MRCKβ e alterações na expressão de CDC42BPB têm sido associadas a programas aberrantes de motilidade celular relevantes em modelos de invasão e metástase do câncer, bem como em contextos mais amplos de remodelação tecidual e microambientes inflamatórios.

MRCKβ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CDC42BPB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MRCKβ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CDC42BPB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CDC42BPB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MRCKβ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CDC42BPB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MRCKβ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MRCKβ em células tumorais com expressão de CDC42BPB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.