MPST Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401643

Visão geral

A MPST (3-mercaptopiruvato sulfurtransferase) humana é uma sulfurtransferase mitocondrial e citosólica que catalisa a conversão de 3-mercaptopiruvato em piruvato, ao mesmo tempo que gera espécies reativas de enxofre e contribui para o metabolismo endógeno de sulfeto de hidrogênio (H2S) e persulfetos. A MPST atua na homeostase redox celular, na utilização de aminoácidos sulfurados e na regulação da persulfidação de proteínas, com efeitos a jusante sobre a bioenergética mitocondrial e a sinalização de resposta ao estresse. Alterações na atividade da MPST têm sido associadas à sensibilidade ao estresse oxidativo e à desregulação metabólica, e mudanças na expressão de MPST ou na sinalização por enxofre são estudadas em contextos como neurobiologia, sinalização cardiovascular e adaptação de células cancerosas. Como parte da rede mais ampla de transsulfuração e de enxofre reativo, a MPST oferece um ponto de entrada mecanístico para dissecar a sinalização dependente de tióis e a função mitocondrial.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO MPST (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene MPST em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do MPST, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do MPST na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína MPST.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de MPST para a investigação da sinalização de MPST, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) MPST críticos para a função MPST
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos MPST para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo MPST Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo MPST Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus MPST. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo MPST Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR MPST (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia MPST para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo MPST definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.