MO25 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404607

Panoramica

CAB39 codifica MO25, una proteina scaffold conservata che stabilizza e attiva il complesso della chinasi oncosoppressore LKB1 (STK11) insieme alle pseudochinasi STRAD. Attraverso questo complesso, MO25 favorisce la fosforilazione delle chinasi della famiglia AMPK, collegando lo stato energetico cellulare a vie che controllano il metabolismo, la polarità cellulare, le risposte allo stress e la regolazione della crescita. La segnalazione dipendente da MO25 influenza l’organizzazione epiteliale e la dinamica del citoscheletro, processi spesso alterati nella biologia del cancro e in modelli di disfunzione metabolica. Un’attività alterata dell’asse LKB1–STRAD–MO25 è quindi rilevante per studi sul controllo della proliferazione, sul sensing dei nutrienti e su fenotipi associati alla polarità.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MO25 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CAB39 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CAB39 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CAB39 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MO25.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CAB39 per lo studio della segnalazione di MO25, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CAB39 critici per la funzione di MO25
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CAB39 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MO25 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MO25 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CAB39. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MO25 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MO25 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CAB39 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CAB39 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.