MMTAG2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-413147-ACT

ヒトC1orf35はMMTAG2をコードしており、増殖性組織における注釈情報および発現プロファイリングに基づいて、ミトコンドリア機能や代謝制御との関連が示唆されているものの、機能解析が十分に進んでいないタンパク質です。現在の知見からは、MMTAG2がミトコンドリアの恒常性維持や、エネルギー産生および酸化還元バランスに影響する細胞ストレス適応過程に関与する可能性が考えられています。ミトコンドリア機能の変調と代謝の再配線は、がん生物学や神経変性疾患モデルで繰り返し観察される特徴であるため、C1orf35/MMTAG2はバイオエネルギー関連表現型の機序解明研究に有用な標的となります。また本遺伝子に関する研究は、ミトコンドリアシグナル伝達が細胞周期制御やプロテオスタシス（タンパク質恒常性）と交差する状況における経路マッピングにも寄与します。

MMTAG2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性C1orf35の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MMTAG2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における C1orf35 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はC1orf35転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MMTAG2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のC1orf35遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMMTAG2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびC1orf35発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMMTAG2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。