MMP-13 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-421670-ACT

Mmp13は、マトリックスメタロプロテイナーゼ13（MMP-13）をコードしており、分泌型のコラゲナーゼとして線維性コラーゲンやその他の細胞外マトリックス基質を切断し、組織リモデリングの調節に関与します。マウスでは、MMP-13は炎症性刺激や機械的刺激によって誘導され、MAPKおよびNF-κBシグナル伝達を介するサイトカイン駆動性プログラムと統合されることで、細胞移動、分化、マトリックスのターンオーバーを調節するプロテアーゼ・カスケードに寄与します。MMP-13活性の制御異常は、軟骨および骨のリモデリング過程と関連づけられており、変形性関節症、関節炎に伴う炎症、腫瘍微小環境のリモデリング、線維化のモデルで頻繁に研究されています。MMP-13は細胞外マトリックスの構築を再編することから、筋骨格系研究において、軟骨細胞の肥大化や骨芽細胞分化（骨形成分化）の指標としても用いられています。

MMP-13 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Mmp13の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MMP-13 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Mmp13 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMmp13転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MMP-13の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMmp13遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMMP-13依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMmp13発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMMP-13経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。