MMP-13 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400626-ACT

O MMP13 humano codifica a metaloproteinase de matriz 13 (MMP-13), uma endopeptidase secretada dependente de zinco que cliva colágenos fibrilares e outros componentes da matriz extracelular para coordenar a remodelação tecidual. A atividade da MMP-13 interage com a renovação da matriz extracelular, a migração celular e a sinalização inflamatória, e é regulada por programas induzidos por citocinas que convergem em respostas transcricionais ligadas a MAPK e NF-κB. A expressão desregulada de MMP13 é frequentemente associada à degradação patológica da matriz e à sinalização estromal alterada em contextos como osteoartrite, artrite reumatoide e remodelação do microambiente tumoral. Como um efetor-chave do catabolismo do colágeno, a MMP-13 é amplamente utilizada como leitura molecular da degeneração da cartilagem e de fenótipos invasivos em estudos mecanísticos.

MMP-13 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MMP13 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MMP-13 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MMP13 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MMP13, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MMP-13. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MMP13 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MMP-13 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MMP-13 em células tumorais com expressão de MMP13 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.