MMP-11 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404334-ACT

O gene humano **MMP11** codifica a metaloproteinase de matriz 11 (MMP-11; estromelisina-3), uma endopeptidase secretada dependente de zinco que remodela a matriz extracelular e modula a proteólise pericelular. Ao contrário de muitas MMPs, a MMP-11 é ativada intracelularmente por convertases do tipo furina e influencia as interações estroma–epitélio, a migração celular e programas de remodelação tecidual ligados ao reparo de feridas e a processos do desenvolvimento. A atividade da MMP-11 se cruza com a organização da matriz extracelular, a sinalização por integrinas e a biodisponibilidade de fatores de crescimento, moldando sinais do microambiente que regulam a proliferação e fenótipos associados à invasão. A expressão desregulada de **MMP11** tem sido associada à remodelação tumoral–estromal e a microambientes fibróticos ou inflamatórios, tornando-o um alvo relevante para estudos mecanísticos da biologia de doenças impulsionadas pela matriz.

MMP-11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MMP11 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MMP-11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MMP11 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MMP11, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MMP-11. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MMP11 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MMP-11 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MMP-11 em células tumorais com expressão de MMP11 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.