MLL2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401659-ACT

KMT2D (MLL2) codifica uma metiltransferase de lisina em histonas contendo domínio SET, que catalisa a mono- e di-metilação de H3K4 em enhancers, moldando a acessibilidade da cromatina e programas transcricionais específicos de linhagem. Por meio de interações com complexos do tipo COMPASS, a MLL2 coordena a ativação de enhancers, o recrutamento da RNA polimerase II e a regulação gênica de longo alcance, importantes para o desenvolvimento e a identidade celular. A disrupção do controle epigenético associado a KMT2D está ligada a estados de diferenciação alterados, respostas a danos no DNA e a uma ampla desregulação transcricional observada em múltiplos contextos de câncer e doenças do desenvolvimento. Como regulador de paisagens de enhancers, KMT2D é amplamente estudado em vias que governam a especificação do destino celular, a sinalização imune e o controle, dependente de cromatina, da proliferação.

MLL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KMT2D sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MLL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KMT2D em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KMT2D, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MLL2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KMT2D nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MLL2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MLL2 em células tumorais com expressão de KMT2D silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.