MLL Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401307-ACT

KMT2A (MLL) codifica uma metiltransferase de lisina em histonas com domínio SET que catalisa a metilação de H3K4 para regular a acessibilidade da cromatina e programas transcricionais que controlam o desenvolvimento hematopoético e a especificação do destino celular. A MLL atua em grandes complexos nucleares que coordenam a escrita epigenética com o alongamento transcricional em promotores e enhancers, impactando vias como a regulação de genes HOX, respostas a danos no DNA e diferenciação. A desregulação de KMT2A por expressão alterada ou rearranjos genômicos está fortemente associada a estados transcricionais aberrantes na leucemia e em outras malignidades, tornando a MLL um nó central para o estudo do controle epigenético da expressão gênica oncogênica. Seu amplo papel na regulação mediada pela cromatina também sustenta a investigação de efeitos dependentes do contexto sobre proliferação, comprometimento de linhagem e estabilidade de redes transcricionais em células humanas.

MLL O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KMT2A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MLL O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KMT2A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KMT2A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MLL. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KMT2A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MLL no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MLL em células tumorais com expressão de KMT2A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.