MLKL Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401248-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- MLKLO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase MLKL (h) e o Plasmídeo Double Nickase MLKL (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para MLKL. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:MLKL Anticorpo (3B2): sc-293201
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
MLKL Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-401248-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MLKL Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-401248-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
A pseudocinase semelhante ao domínio de quinase de linhagem mista (MLKL) é um efetor terminal da necroptose, ativado a jusante da sinalização RIPK1/RIPK3 para executar a permeabilização regulada da membrana após estímulos inflamatórios ou de receptores de morte. Após a fosforilação por RIPK3, a MLKL sofre oligomerização e transloca-se para membranas celulares, promovendo desregulação iônica e morte celular lítica que molda respostas imunes inatas. A atividade da MLKL cruza-se com vias impulsionadas por TNF, TLR e interferons, influenciando a liberação de citocinas e o dano tecidual durante inflamação estéril e infecção. A sinalização necroptótica desregulada envolvendo MLKL tem sido implicada em modelos de neuroinflamação, lesão por isquemia-reperfusão, patologia inflamatória intestinal e interações tumor–imunidade, tornando-a um nó útil para dissecação de vias.
MLKL O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus MLKL em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de MLKL. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função MLKL. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com MLKL interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.