MLH1 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-421660-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- MLH1O plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase MLH1 (m) e o Plasmídeo Double Nickase MLH1 (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Mlh1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:MLH1 Anticorpo (B-12): sc-271978
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
MLH1 Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-421660-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MLH1 Plasmídeo duplo de Nickase (m2) | sc-421660-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mlh1 codifica a proteína MLH1, um componente central da maquinaria de reparo de pareamento incorreto do DNA (MMR), que protege a integridade do genoma ao corrigir incompatibilidades base–base e alças de inserção–deleção que surgem durante a replicação do DNA. A MLH1 atua em complexos MutL, coordenando-se com homólogos de MutS para acoplar o reconhecimento do erro à excisão e à ressíntese, e também participa da sinalização de dano ao DNA e do processamento de intermediários de recombinação. Em células de camundongo, a atividade prejudicada de MLH1 aumenta a mutagênese associada à replicação e a instabilidade de microssatélites, conectando defeitos em MMR a fenótipos de instabilidade genômica amplamente usados em biologia do câncer e em pesquisas sobre reparo de DNA. Assim, Mlh1 é frequentemente estudado em vias que governam o acúmulo de mutações, respostas de checkpoint e a manutenção do genoma.
MLH1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Mlh1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Mlh1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Mlh1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Mlh1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.