Miz-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402110-ACT

ZBTB17 codifica o fator de transcrição Miz-1, uma proteína de dedos de zinco BTB/POZ que se liga a elementos iniciadores e coordena programas de transcrição dependentes do contexto que controlam a progressão do ciclo celular, a diferenciação e as respostas ao estresse. O Miz-1 integra sinalização e regulação transcricional por meio de interações com cofatores como MYC e complexos modificadores de cromatina, modulando assim a expressão de genes como CDKN1A/p21 e outros reguladores associados a checkpoints. Por meio dessas redes, o Miz-1 influencia o equilíbrio entre proliferação e apoptose e a expressão gênica específica de linhagem, tornando o ZBTB17 um nodo útil para estudar o controle transcricional em contextos oncogênicos e do desenvolvimento. A desregulação de circuitos transcricionais centrados em Miz-1 tem sido associada a alterações nos checkpoints do ciclo celular e a fenótipos de crescimento aberrantes relevantes para a biologia do câncer e a regulação hematopoética.

Miz-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ZBTB17 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Miz-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ZBTB17 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ZBTB17, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Miz-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ZBTB17 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Miz-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Miz-1 em células tumorais com expressão de ZBTB17 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.