MIXL1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405367-ACT

MIXL1 (mix paired-like homeobox) codifica um fator de transcrição com homeobox que atua como um regulador-chave da especificação do mesendoderma e de programas iniciais da linha primitiva durante o desenvolvimento humano. Ele integra sinais de vias do desenvolvimento como TGF-β/Activina/NODAL, WNT e BMP para coordenar o comprometimento de linhagem e redes transcricionais a jusante que governam decisões de destino celular. A expressão aberrante de MIXL1 foi relatada em neoplasias hematológicas, incluindo subgrupos de leucemia mieloide aguda, nas quais pode indicar estados de diferenciação alterados e desregulação transcricional. Como regulador do desenvolvimento com expressão ectópica associada a doença, MIXL1 é amplamente utilizado como leitura (“readout”) e alvo de perturbação em estudos de diferenciação de células-tronco, modelagem hematopoética e redes transcricionais.

MIXL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MIXL1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MIXL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MIXL1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MIXL1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MIXL1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MIXL1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MIXL1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MIXL1 em células tumorais com expressão de MIXL1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.