Mitofilin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403617-ACT

O gene IMMT humano codifica a mitofilina, uma proteína essencial de sustentação (scaffold) da membrana interna mitocondrial e componente central do complexo MICOS (sistema organizador de sítios de contato mitocondriais e cristas). A mitofilina coordena a formação das junções de cristas, estabiliza a organização da cadeia respiratória e dá suporte à importação de proteínas mitocondriais e ao tráfego de lipídios em sítios de contato intermembrana, conectando a arquitetura mitocondrial à fosforilação oxidativa e à homeostase metabólica. A perturbação da estrutura de cristas dependente de IMMT está associada a dinâmica mitocondrial alterada, bioenergética comprometida e maior suscetibilidade a respostas celulares ao estresse. O IMMT tem sido investigado no contexto de distúrbios que envolvem disfunção mitocondrial, incluindo a biologia de doenças neurodegenerativas e cardiometabólicas, nas quais o remodelamento de cristas pode influenciar vias de sinalização e de sobrevivência celular.

Mitofilin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IMMT sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Mitofilin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IMMT em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IMMT, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Mitofilin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IMMT nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Mitofilin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Mitofilin em células tumorais com expressão de IMMT silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.