mitochondrial ferritin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401694
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- mitochondrial ferritin El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico mitochondrial ferritin, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: mitochondrial ferritin Anticuerpo (6G3): sc-517048
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
mitochondrial ferritin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401694 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
FTMT codifica la ferritina mitocondrial, una proteína de almacenamiento de hierro localizada en la matriz mitocondrial que secuestra el exceso de hierro y limita la generación de especies reactivas de oxígeno impulsada por el hierro. Al amortiguar los reservorios de hierro lábil, FTMT influye en la homeostasis redox mitocondrial, la integridad de la fosforilación oxidativa y la respuesta celular al estrés metabólico y oxidativo. Su actividad se entrecruza con el metabolismo del hierro y la biología del hemo y de los clústeres Fe–S, vinculando la función mitocondrial con vías más amplias de manejo del hierro. La expresión desregulada de FTMT se ha asociado con acumulación alterada de hierro y fenotipos de daño oxidativo relevantes para la neurodegeneración, respuestas al estrés relacionadas con la anemia y modelos de disfunción mitocondrial.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO mitochondrial ferritin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen FTMT en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del FTMT junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de FTMT tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína mitochondrial ferritin.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en FTMT para la investigación de la señalización de mitochondrial ferritin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de FTMT críticos para la función de mitochondrial ferritin
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de FTMT para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido mitochondrial ferritin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido mitochondrial ferritin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus FTMT. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR mitochondrial ferritin (h) y el plásmido HDR mitochondrial ferritin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología FTMT para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana FTMT definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.