MIP-3β Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403239-ACT

CCL19 codifica a proteína inflamatória de macrófagos-3β (MIP-3β), uma quimiocina CC que se liga ao CCR7 para direcionar a quimiotaxia de células T, células B e células dendríticas maduras. Esse eixo ligante–receptor ajuda a estabelecer a organização do tecido linfoide e regula o tráfego de células imunes para órgãos linfoides secundários, integrando-se a redes de sinalização inflamatória que moldam a apresentação de antígenos e o priming da imunidade adaptativa. A sinalização de CCR7 induzida por CCL19 influencia a remodelação do citoesqueleto e programas migratórios, afetando o posicionamento de leucócitos em microambientes de linfonodos. A atividade desregulada de CCL19/CCR7 tem sido implicada em estados inflamatórios crônicos e no recrutamento de células imunes associado a tumores, o que a torna relevante para estudos de infiltração imune e de crosstalk do microambiente.

MIP-3β O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CCL19 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MIP-3β O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CCL19 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CCL19, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MIP-3β. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CCL19 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MIP-3β no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MIP-3β em células tumorais com expressão de CCL19 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.