MIP-3α Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417242-ACT

CCL20 codifica a quimiocina proteína inflamatória de macrófagos-3α (MIP-3α), um ligante secretado do CCR6 que direciona a quimiotaxia de células dendríticas imaturas, células T efetoras/de memória e células B para locais de ativação epitelial. A MIP-3α é induzida pela sinalização de NF-κB e MAPK a jusante de recetores de reconhecimento de padrões e de citocinas inflamatórias, ligando a deteção imunitária inata ao recrutamento de leucócitos e à defesa da barreira mucosa. Esse eixo de quimiocina molda a organização do tecido linfoide, a amostragem de antigénios e a polarização imunitária associada a Th17 no microambiente tecidual. A sinalização CCL20/CCR6 desregulada tem sido implicada em condições inflamatórias crónicas e na inflamação associada a tumores, tornando-a relevante para o estudo do tráfego de células imunitárias e da remodelação de circuitos inflamatórios.

MIP-3α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CCL20 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MIP-3α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CCL20 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CCL20, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MIP-3α. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CCL20 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MIP-3α no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MIP-3α em células tumorais com expressão de CCL20 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.