MIF Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421649-ACT

O fator inibitório da migração de macrófagos (MIF), codificado pelo gene **Mif** em camundongos, é uma proteína pleiotrópica do tipo citocina que coordena respostas imunes inatas e adaptativas ao modular a ativação de macrófagos, o recrutamento de leucócitos e a produção de mediadores inflamatórios. O MIF interage com vias de sinalização-chave, incluindo MAPK/ERK e PI3K/AKT, e pode influenciar programas transcricionais dependentes de NF-κB, moldando respostas ao estresse celular e a sobrevivência. Por meio de interações com receptores como CD74 e receptores de quimiocinas, o MIF sustenta a quimiotaxia e o crosstalk inflamatório em microambientes teciduais. A expressão desregulada de MIF tem sido associada à inflamação crônica e à patologia mediada pelo sistema imune, sendo frequentemente estudada no contexto de inflamação associada a tumores, desregulação metabólica e redes de sinalização relevantes para fibrose.

MIF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Mif sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MIF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Mif em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Mif, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MIF. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Mif nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MIF no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MIF em células tumorais com expressão de Mif silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.