MIF Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400574-ACT

O fator inibidor da migração de macrófagos (MIF) é uma citocina humana pleiotrópica com atividade de tautomerase que regula respostas imunes inatas e adaptativas, a sobrevivência celular e a sinalização de estresse. Ele atua por meio de receptores como o CD74, com correceptores como CXCR2/CXCR4, acionando as vias MAPK/ERK, PI3K/AKT e NF-κB, a fim de modular a expressão gênica inflamatória e o recrutamento de leucócitos. O MIF também interage com a sinalização de glicocorticoides e com a homeostase redox, influenciando a polarização de macrófagos, programas angiogênicos e a dinâmica do microambiente tumoral–imune. A expressão desregulada de MIF tem sido associada a distúrbios inflamatórios crônicos, fibrose e processos relacionados ao câncer, tornando-o um nó útil para estudos mecanísticos de regulação imune e de redes de sinalização relevantes para doenças.

MIF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MIF sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MIF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MIF em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MIF, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MIF. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MIF nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MIF no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MIF em células tumorais com expressão de MIF silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.