Midnolin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-425598

概要

Midn（midnolin）は、転写プログラムおよびプロテオスタシスの制御に関与するとされる核小体関連タンパク質をコードしており、神経分化や細胞ストレス応答との関連が報告されています。ミドノリンは核小体および核内区画に豊富に存在することと整合的に、リボソーム生合成やタンパク質品質管理に影響する核内プロセスに関与すると考えられています。MIDNの発現変化は神経生物学的表現型と関連づけられており、ドパミン作動性ニューロンの機能や神経変性に関連する経路の文脈で検討されてきました。マウスモデルでは、Midnは核小体シグナルが発生およびストレス適応における遺伝子制御とどのように接続するかを解明するための、扱いやすい解析ノードとなります。

Midnolin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるMidn遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Midn内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Midnのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Midnolinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Midnolinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Midn欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Midnolinの機能に不可欠なMidnエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Midnゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Midnolin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびMidnolin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Midn遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Midnolin HDRプラスミド（m）および Midnolin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMidnホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMidn標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。