MICB Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401524-ACT

O MICB codifica a sequência B relacionada ao polipeptídeo do MHC classe I, um ligante induzível por estresse exibido na superfície de células humanas que interage com o receptor ativador NKG2D em células NK e em subpopulações de células T. A expressão de MICB é regulada por programas celulares de estresse, incluindo respostas a danos no DNA, estresse oxidativo e sinalização associada a infecções, conectando a vigilância imunológica inata a mudanças na proteostase e no controle do ciclo celular. Como parte do eixo de ligantes de NKG2D, o MICB participa de vias de imunorreconhecimento que influenciam a ativação de linfócitos citotóxicos e a produção de citocinas. A expressão desregulada de MICB ou seu shedding (liberação/clivagem da forma de superfície) tem sido associada a fenótipos de evasão imune e à sinalização inflamatória na biologia do câncer e em modelos de infecção crônica, sustentando seu uso em estudos de interações tumor–imune.

MICB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MICB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MICB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MICB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MICB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MICB. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MICB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MICB no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MICB em células tumorais com expressão de MICB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.