MGMT Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421647

Descripción general

Mouse **Mgmt** codifica la **O-6-metilguanina-ADN metiltransferasa (MGMT)**, una enzima de reparación directa del ADN que elimina aductos alquilo en la posición O6 de la guanina transfiriendo la lesión a una cisteína del sitio activo en una reacción “suicida” de un solo uso. Esta actividad contrarresta la mutagénesis y el estrés replicativo derivados del daño alquilante endógeno y ambiental, y se integra con programas de mantenimiento del genoma que influyen en el procesamiento de la reparación de desajustes (mismatch repair) y en la señalización de los puntos de control del ciclo celular. La función o expresión alteradas de MGMT se estudian ampliamente en contextos de inestabilidad genómica inducida por alquilación y biología tumoral, donde la capacidad de reparación del ADN puede moldear los espectros de mutación y las respuestas celulares al estrés. En ratón, **Mgmt** ofrece un sistema manejable para investigar vías de respuesta al daño del ADN, la biología de reparación específica de tejidos y los mecanismos que vinculan las lesiones por alquilación con modelos de carcinogénesis y neurotoxicidad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MGMT (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Mgmt en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Mgmt junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Mgmt tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MGMT.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Mgmt para la investigación de la señalización de MGMT, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Mgmt críticos para la función de MGMT
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Mgmt para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MGMT CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido MGMT CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Mgmt. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MGMT (m) y el plásmido HDR MGMT (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Mgmt para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Mgmt definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.