Plasmide CRISPR d'Activation (h) MFAP4: sc-405012-ACT

MFAP4 (glycoprotéine 4 associée aux microfibrilles) code une glycoprotéine de la matrice extracellulaire, enrichie dans les microfibrilles associées aux fibres élastiques et exprimée par des types cellulaires mésenchymateux et vasculaires. MFAP4 participe à l’organisation de la matrice et à la communication cellule–matrice, en favorisant l’adhésion et la signalisation via des voies liées aux intégrines, lesquelles influencent le comportement des cellules musculaires lisses, l’activité des fibroblastes et le remodelage tissulaire. La dérégulation de l’expression et du dépôt de MFAP4 est fréquemment étudiée dans des contextes de remodelage vasculaire, de renouvellement de la matrice extracellulaire associé à la fibrose et de réponses stromales inflammatoires. En tant que facteur associé à la matrice, MFAP4 constitue un marqueur de lecture utile et un modulateur dans des modèles examinant la dynamique de la matrice extracellulaire, la mécanotransduction et des phénotypes dépendants du microenvironnement.

MFAP4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MFAP4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MFAP4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MFAP4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MFAP4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MFAP4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MFAP4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MFAP4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MFAP4 dans les cellules tumorales présentant une expression de MFAP4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.