METTL3 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-404029-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- METTL3O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase METTL3 (h) e o Plasmídeo Double Nickase METTL3 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para METTL3. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:METTL3 Anticorpo (D-9): sc-518180
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
METTL3 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-404029-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
METTL3 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-404029-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
METTL3 codifica o núcleo catalítico do complexo metiltransferase de N6-metiladenosina (m6A) do mRNA, atuando em parceria com a METTL14 e com cofatores como a WTAP para instalar marcas de m6A em RNAs codificadores e não codificadores. Essa modificação de RNA influencia a estabilidade dos transcritos, o splicing, a exportação nuclear e a tradução, moldando programas ligados ao controle do ciclo celular, à diferenciação, às respostas ao estresse e à sinalização imune inata. A regulação de m6A dependente de METTL3 se cruza com vias de metabolismo de RNA e com o controle epitranscritômico da expressão gênica, incluindo a modulação de saídas de sinalização como MAPK, PI3K–AKT e redes de resposta a dano ao DNA por meio de alterações no destino do mRNA. A atividade desregulada de METTL3 tem sido associada a diversos fenótipos relevantes para doenças em biologia do câncer, hematopoiese e contextos inflamatórios, tornando-a um alvo frequente em estudos mecanísticos de regulação baseada em RNA.
METTL3 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus METTL3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de METTL3. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função METTL3. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com METTL3 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.