METTL3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (bovine): sc-437359-ACT

METTL3 codifica o núcleo catalítico do complexo metiltransferase de RNA N6-metiladenosina (m6A), um importante regulador epitranscritômico do destino de mRNAs e RNAs não codificadores em células bovinas. Ao depositar marcas de m6A, o METTL3 influencia o splicing de RNA, a exportação nuclear, a eficiência de tradução e a estabilidade dos transcritos, integrando-se a vias que governam a progressão do ciclo celular, programas de diferenciação, respostas ao estresse e sinalização imune inata. Alterações na atividade de METTL3 estão amplamente associadas a redes de expressão gênica desreguladas e a fenótipos relevantes para transformação oncogênica, sinalização inflamatória e defeitos do desenvolvimento entre espécies. Em modelos biomédicos e comparativos bovinos, a modulação de METTL3 dá suporte a estudos mecanísticos do controle do estado celular e dos circuitos regulatórios gênicos dependentes de metilação de RNA.

METTL3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (bovine) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de sem alterar a sequência de ADN subjacente.

METTL3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (bovine) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição , onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de METTL3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de METTL3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via METTL3 em células tumorais com expressão de silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.