METRNL CRISPR Activationプラスミド (m): sc-431669-ACT

Metrnl は、細胞間コミュニケーションに関与する分泌タンパク質 meteorin-like（METRNL）をコードしており、末梢組織における代謝恒常性と免疫調節プログラムの協調を担うと考えられています。マウスモデルでは、METRNL の発現は脂肪組織のリモデリング、マクロファージの極性化、適応的な熱産生応答と関連し、栄養状態の感知と炎症シグナルを統合する役割が示唆されています。報告されている作用から、METRNL はサイトカインシグナル伝達、細胞外マトリックスとの相互作用、組織修復過程に関わる経路と結び付けられており、これらを介して全身のエネルギーバランスに影響すると考えられます。Metrnl の機能異常は、肥満に伴う炎症、インスリン抵抗性、心代謝表現型の文脈で検討されており、代謝疾患の生物学的機序を研究するうえで有用な解析ノードとなることが示されています。

METRNL CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Metrnlの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

METRNL CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Metrnl 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMetrnl転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性METRNLの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMetrnl遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMETRNL依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMetrnl発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMETRNL経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。