MetAP-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402529-ACT

O METAP2 humano codifica a metionina aminopeptidase 2 (MetAP-2), uma metaloprotease citosólica que remove a metionina iniciadora de polipeptídeos nascente, uma etapa-chave do processamento N-terminal que pode influenciar a estabilidade, a localização e a N-acetilação subsequente das proteínas. Por meio de seu papel na maturação proteica cotraducional, a MetAP-2 contribui para a proteostase e impacta programas de crescimento acoplados à tradução e a progressão do ciclo celular. A atividade de METAP2 tem sido associada a vias que regulam a capacidade proliferativa e a adaptação ao estresse celular, tornando-a relevante para estudos mecanísticos de crescimento desregulado em oncologia e para investigações de fenótipos metabólicos e angiogênicos. Alterações na expressão ou na função de METAP2 podem, portanto, servir como um ponto de partida para investigar como o processamento N-terminal se integra a redes de sinalização e à aptidão celular.

MetAP-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de METAP2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MetAP-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus METAP2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição METAP2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MetAP-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus METAP2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MetAP-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MetAP-2 em células tumorais com expressão de METAP2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.