Met CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400101-ACT

METは、ヒト受容体型チロシンキナーゼであるMet（肝細胞増殖因子：HGFの主要なシグナル受容体）をコードする。リガンド依存的なMetの活性化は自己リン酸化を引き起こし、PI3K–AKT、RAS–MAPK、STAT、SRC/FAKなどの下流カスケードへとシグナルを伝播させ、増殖・生存・細胞運動性・上皮間葉転換（EMT）プログラムを協調的に制御する。過剰発現、増幅、活性化変異、あるいは異常なオートクラインシグナルによるMET経路の破綻は、浸潤性増殖、転移能、組織再生応答における役割から、腫瘍学および発生生物学で頻繁に研究されている。

Met CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性METの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Met CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MET 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMET転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Metの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMET遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMet依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMET発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMet経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。