Mel-CAM CRISPR Activationプラスミド (m): sc-429966-ACT

マウスのMcamは、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する接着受容体Mel-CAM（CD146/MCAM）をコードしており、細胞表面に豊富に存在して細胞—細胞間および細胞—細胞外マトリックス間相互作用を調節します。Mel-CAMは血管内皮および血管周囲の生物学的過程に関与し、フォーカルアドヒージョンのダイナミクスやRhoファミリーGTPase経路と交差するシグナル伝達ノードを介して、細胞骨格の再構築、遊走、バリア機能に関連するプロセスに影響を与えます。免疫系および間質の文脈では、MCAMの発現が白血球のトラフィッキングや組織リモデリングを左右し、発現異常は病的血管新生、線維化に伴うリモデリング、腫瘍進展に関連する表現型と結び付けられています。これらの特性により、Mcamはマウスモデルにおいて、接着依存的シグナル伝達、血管ニッチの制御、ならびに疾患関連の細胞状態に対する微小環境の寄与を解析するための有用な標的となります。

Mel-CAM CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Mcamの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Mel-CAM CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Mcam 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMcam転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Mel-CAMの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMcam遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMel-CAM依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMcam発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMel-CAM経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。