megalin/LRP2 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401094-NIC

LRP2 codifica a megalina, um grande receptor endocítico da família dos receptores de LDL, altamente expresso em células epiteliais polarizadas, que medeia a captação dependente de clatrina de diversos ligantes, incluindo transportadores de vitaminas, lipoproteínas, hormonas e complexos de sinalização. A megalina coopera com proteínas adaptadoras e correceptores para regular a endocitose mediada por recetor, o tráfego lisossomal, o manuseamento epitelial de nutrientes e a homeostase celular no túbulo proximal renal e noutros tecidos absorptivos. Por meio de interações com vias como o transporte de retinoides e de vitamina D, o processamento de morfogénios relacionados com o sonic hedgehog e a regulação da depuração de proteínas extracelulares, a LRP2 influencia processos de desenvolvimento e metabólicos. A disrupção genética ou a desregulação de LRP2 tem sido associada a anomalias do desenvolvimento sindrómicas e a fenótipos de disfunção tubular renal, sustentando a sua relevância para estudos mecanísticos da biologia epitelial e da sinalização endocítica.

megalin/LRP2 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus LRP2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de LRP2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função LRP2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com LRP2 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.