MEF-2A CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400484-ACT

MEF2Aは転写因子MEF-2Aをコードしており、MEF2エレメントに結合して組織特異的な遺伝子発現プログラムを制御する、myocyte enhancer factor 2（MEF2）ファミリーの一員です。MEF-2Aはカルシウム依存性シグナル伝達とMAPK経路を統合し、筋形成、神経活動依存的な遺伝子制御、ならびに血管／内皮機能に影響する転写応答を協調的に調整します。さらに、クラスIIa HDACなどの共因子との相互作用を介して、クロマチン状態を刺激応答性の転写および細胞分化と結び付けます。MEF2A活性の変化は心血管系および神経発達に関わる表現型と関連づけられており、疾患関連経路における転写制御の機構研究のための重要な結節点（ノード）としての有用性が示唆されています。

MEF-2A CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MEF2Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MEF-2A CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MEF2A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMEF2A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MEF-2Aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMEF2A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMEF-2A依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMEF2A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMEF-2A経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。