Med22 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423222

概要

Med22は、配列特異的転写因子とRNAポリメラーゼIIをつなぐ、保存性の高い転写共調節因子であるMediator複合体の中核サブユニットをコードしています。マウス細胞ではMED22がMediatorヘッドモジュールの組み立てと機能を支え、プロモーター依存的な転写、転写開始のダイナミクス、さらに発生や分化に結びつく広範な遺伝子発現プログラムに影響します。シグナル依存的な転写応答を協調させることで、MED22は細胞周期制御、ストレス応答、系譜決定を司る経路に寄与します。Mediator構成因子の機能異常は、転写恒常性の変化や疾患に関連する表現型と結び付けられており、Med22は転写ネットワークの脆弱性を探る上で有用なノードとなります。

Med22 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるMed22遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Med22内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Med22のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Med22タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Med22シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Med22欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Med22の機能に不可欠なMed22エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Med22ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Med22 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびMed22 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Med22遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Med22 HDRプラスミド（m）および Med22 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMed22ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMed22標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。