MDFIC CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421259
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- MDFIC CRISPR/Cas9 ノックアウト（KO）プラスミド（m）は、GeCKO v2ライブラリ由来の配列を用いて最大のノックアウト効率を実現するよう設計された、Cas9ヌクレアーゼおよび標的特異的な20塩基対のガイドRNA（gRNA）をそれぞれコードするプラスミドのプールです
- gRNA配列は、Cas9を誘導してMDFICゲノム座において部位特異的な二本鎖切断（DSBs）を引き起こし、非相同末端結合（NHEJ）を介して遺伝子ノックアウトをもたらします
- ピューロマイシン耐性遺伝子とRFP遺伝子はLoxP部位で挟まれているため、安定したノックアウト細胞株を樹立した後、Creリコンビナーゼ（Creベクター：sc-418923）を用いて選択マーカーを除去することができる。
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
MDFIC CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m) | sc-421259 | 20 µg | $397.00 |
概要
マウスのMdficは、転写調節および系統特異的な遺伝子発現プログラムの制御に関与するとされる、MyoDファミリー阻害因子様の核内タンパク質MDFICをコードしています。MDFICはbHLH転写因子の活性に影響を及ぼすことが報告されており、細胞の分化状態の制御や増殖に関連する転写出力と結び付けられています。これらの調節機能を通じて、MDFICは発生関連遺伝子ネットワークや、状況依存的なストレス応答／増殖応答を司る経路と交差し得ます。MDFICの発現または機能の変化は、がん生物学や発生表現型に関連する転写制御の破綻と関連付けて文献で報告されており、機構解明の研究標的としての有用性が示唆されています。
MDFIC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるMdfic遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Mdfic内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。
このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Mdficのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MDFICタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。
このCRISPRノックアウトシステムにより、MDFICシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Mdfic欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。
主な特徴
- MDFICの機能に不可欠なMdficエクソンを標的とするsgRNA
導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
ノックアウト効率を向上させるための、Mdficゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
トランスフェクションによる導入に対応
設計バリエーション
CRISPRs +/- HDR
- MDFIC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびMDFIC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Mdfic遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
MDFIC HDRプラスミド（m）および MDFIC HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMdficホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMdfic標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。