MCT8 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403824-ACT

SLC16A2 codifica o transportador de monocarboxilatos 8 (MCT8), um transportador de hormônios tireoidianos de alta afinidade presente na superfície celular, que medeia a captação e o efluxo de triiodotironina (T3) e tiroxina (T4), modulando a disponibilidade intracelular de hormônios tireoidianos. Ao controlar a entrada do hormônio em neurônios, células da glia e outros tipos celulares responsivos, o MCT8 ajuda a regular programas transcricionais dependentes do receptor de hormônio tireoidiano, que influenciam o neurodesenvolvimento, o metabolismo energético e a diferenciação celular. Alterações na função de SLC16A2 estão associadas a uma distribuição prejudicada de hormônios tireoidianos entre os tecidos, com forte relevância para fenótipos neurodesenvolvimentais e neurológicos e para modelos de desequilíbrio na sinalização de hormônios tireoidianos. Em contextos de pesquisa, o MCT8 é frequentemente estudado no âmbito do transporte de membrana, da comunicação cruzada endócrina e de redes de expressão gênica a jusante impulsionadas por vias responsivas a T3.

MCT8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC16A2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MCT8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC16A2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC16A2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MCT8. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC16A2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MCT8 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MCT8 em células tumorais com expressão de SLC16A2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.