MCT1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400363-NIC

SLC16A1 codifica o transportador de monocarboxilatos 1 (MCT1), um simportador da membrana plasmática acoplado a prótons que medeia o transporte bidirecional de lactato, piruvato e corpos cetónicos através da membrana celular. Ao acoplar o fluxo de monocarboxilatos a gradientes de prótons, o MCT1 regula o pH intracelular, o equilíbrio redox e a comunicação metabólica entre células glicolíticas e oxidativas, influenciando vias como a glicólise, a fosforilação oxidativa e a adaptação metabólica associada à hipóxia. A função do MCT1 integra-se com o tráfego dependente de chaperonas e a estabilização na membrana (por exemplo, CD147/BSG), afetando a disponibilidade de substratos e a sinalização em tecidos metabolicamente ativos. Alterações na expressão ou atividade de SLC16A1 têm sido associadas a uma regulação anómala do manuseamento de lactato e do metabolismo energético na biologia do cancro, na fisiologia do músculo esquelético e em contextos neurológicos, tornando-o um alvo relevante para estudos mecanísticos de reprogramação metabólica.

MCT1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus SLC16A1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de SLC16A1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função SLC16A1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com SLC16A1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.