MCP-5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422836
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- MCP-5 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico MCP-5, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:MCP-5 Anticorpo (16Q07): sc-74220
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
MCP-5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422836 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O Ccl12 de camundongo codifica a proteína quimioatraente de monócitos-5 (MCP-5), uma quimiocina CC que promove a quimiotaxia de monócitos/macrófagos e de outros subgrupos de leucócitos durante respostas inflamatórias. A MCP-5 sinaliza principalmente por meio de receptores de quimiocinas, como o CCR2, para acionar vias mediadas por GPCR que remodelam o citoesqueleto e coordenam a migração direcionada, integrando-se a redes mais amplas de sinalização de citocinas e da imunidade inata. Estudos in vivo e in vitro relacionam a atividade de Ccl12/MCP-5 a programas de infiltração de leucócitos em lesão tecidual e inflamação crônica, com relevância para fibrose, inflamação metabólica e recrutamento mieloide associado a tumores. Como quimiocina secretada, a MCP-5 também serve como um marcador/indicador acessível para avaliar o crosstalk entre células imunes e as interações estroma–imune em modelos murinos.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO MCP-5 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Ccl12 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Ccl12, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Ccl12 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína MCP-5.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Ccl12 para a investigação da sinalização de MCP-5, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Ccl12 críticos para a função MCP-5
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Ccl12 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo MCP-5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo MCP-5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Ccl12. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo MCP-5 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR MCP-5 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Ccl12 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Ccl12 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.