Plasmide CRISPR/Cas9 KO MCP-5 (m): sc-422836

Présentation

Le gène murin **Ccl12** code la protéine chimioattractante des monocytes-5 (**MCP-5**), une chimiokine de la famille CC qui favorise la chimiotaxie des monocytes/macrophages ainsi que d’autres sous-populations de leucocytes lors des réponses inflammatoires. MCP-5 signale principalement via des récepteurs de chimiokines tels que **CCR2** afin d’activer des voies médiées par des **RCPG (GPCR)** qui remodèlent le cytosquelette et coordonnent la migration dirigée, en s’intégrant à des réseaux plus larges de signalisation des cytokines et de l’immunité innée. Des études in vivo et in vitro associent l’activité de Ccl12/MCP-5 à des programmes d’infiltration leucocytaire lors de lésions tissulaires et d’inflammation chronique, avec une pertinence pour la fibrose, l’inflammation métabolique et le recrutement myéloïde associé aux tumeurs. En tant que chimiokine sécrétée, MCP-5 constitue aussi un readout exploitable des interactions entre cellules immunitaires et des interactions stroma–immunité dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MCP-5 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ccl12 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ccl12, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ccl12 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MCP-5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ccl12 pour l'étude de la signalisation de MCP-5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ccl12 essentiels à la fonction de MCP-5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ccl12 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MCP-5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le MCP-5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ccl12. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MCP-5 plasmide HDR (m) et le MCP-5 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ccl12 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ccl12 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.