MCP-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422838-ACT

O gene Ccl2 de camundongo codifica a proteína quimioatraente de monócitos 1 (MCP-1/CCL2), uma quimiocina CC secretada que coordena a quimiotaxia e o recrutamento tecidual de monócitos, macrófagos e outros leucócitos que expressam CCR2. A sinalização de MCP-1 integra-se às redes de citocinas inflamatórias e regula o tráfego de leucócitos, a ativação endotelial e a polarização de macrófagos na resposta imune inata. A indução de Ccl2 é comumente associada a programas transcricionais dependentes de NF-κB e MAPK durante infecção, inflamação estéril e lesão tecidual. A atividade desregulada do eixo MCP-1/CCR2 é frequentemente estudada em contextos como modelos de doenças inflamatórias, inflamação metabólica e infiltração de células mieloides associadas a tumores.

MCP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Ccl2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MCP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Ccl2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Ccl2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MCP-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Ccl2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MCP-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MCP-1 em células tumorais com expressão de Ccl2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.