MCM3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402076-ACT

O MCM3 humano codifica uma subunidade central da helicase MCM2–7, que licencia as origens de replicação do DNA e impulsiona a progressão da forquilha de replicação durante a fase S. Por meio de suas funções na montagem do complexo de pré-replicação, no desenrolamento do DNA e na coordenação da sinalização de checkpoints, o MCM3 ajuda a manter a estabilidade genômica durante a proliferação celular. A atividade desregulada do MCM3 e padrões de expressão alterados estão frequentemente associados a estresse replicativo, instabilidade cromossômica e fenótipos proliferativos observados em diversos cânceres e em outros distúrbios do controle do ciclo celular. Como fator de licenciamento da replicação, o MCM3 é amplamente estudado em vias que conectam o disparo de origens, respostas a danos no DNA e transições do ciclo celular.

MCM3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MCM3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MCM3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MCM3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MCM3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MCM3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MCM3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MCM3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MCM3 em células tumorais com expressão de MCM3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.