Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
MCAD Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-418938
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- MCAD O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico MCAD, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:MCAD Anticorpo (E-8): sc-271931
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
MCAD Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-418938 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Acadm codifica a desidrogenase de acil-CoA de cadeia média (MCAD), uma flavoproteína mitocondrial que catalisa a primeira etapa de desidrogenação na β-oxidação de ácidos graxos de cadeia média, conectando o catabolismo de lipídios à produção celular de ATP e ao equilíbrio redox. A atividade da MCAD sustenta a flexibilidade metabólica durante o jejum e em situações de alta demanda energética ao alimentar o ciclo do TCA e a fosforilação oxidativa por meio de acetil-CoA e da transferência de elétrons via ETF/ETFDH. A disrupção de Acadm perturba a oxidação mitocondrial de ácidos graxos, altera perfis de acilcarnitinas e pode promover efeitos secundários sobre respostas ao estresse oxidativo e redes de sinalização lipídica. A deficiência de MCAD é um erro inato do metabolismo bem estabelecido associado ao uso prejudicado de ácidos graxos, tornando Acadm um nó relevante para estudar a homeostase metabólica mitocondrial em modelos murinos.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO MCAD (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Acadm em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Acadm, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Acadm na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína MCAD.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Acadm para a investigação da sinalização de MCAD, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Acadm críticos para a função MCAD
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Acadm para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo MCAD Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo MCAD Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Acadm. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo MCAD Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR MCAD (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Acadm para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Acadm definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.