MC2-R Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402854-ACT

O MC2R codifica o receptor de melanocortina 2 (MC2-R), um receptor acoplado à proteína G que atua como o principal receptor do hormônio adrenocorticotrópico (ACTH) no córtex adrenal. Após a ligação do ligante, o MC2-R acopla-se à Gs para estimular a adenilato ciclase, elevar os níveis de cAMP e ativar programas transcricionais dependentes de PKA que regulam enzimas esteroidogênicas e a fisiologia adrenal. A atividade do MC2R integra-se à sinalização das melanocortinas e às vias de biossíntese de esteroides adrenais que controlam a produção de glicocorticoides e as respostas ao estresse. A desregulação ou perda de função do MC2R está associada à resposta prejudicada ao ACTH e a fenótipos de insuficiência adrenal, reforçando sua relevância para pesquisas em endocrinologia e sinalização de GPCR.

MC2-R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MC2R sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MC2-R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MC2R em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MC2R, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MC2-R. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MC2R nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MC2-R no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MC2-R em células tumorais com expressão de MC2R silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.