MBD3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401072

概要

MBD3はメチル化CpG結合ドメインタンパク質3をコードしており、ATP依存的なクロマチンリモデリングとヒストン脱アセチル化を結び付けて転写プログラムを制御するNuRD（ヌクレオソームリモデリング／脱アセチル化）複合体の中核構成要素です。MBDファミリーの一部のメンバーとは異なり、MBD3はメチル化CpG DNAへの親和性が限定的ですが、タンパク質間相互作用やクロマチン環境を介してNuRDを特定のゲノム座位へ標的化するうえで必須です。NuRDを通じて、MBD3は細胞運命決定、DNA損傷応答、増殖および分化に影響するクロマチン状態の維持の制御に寄与します。MBD3/NuRDに関連するエピジェネティック制御の破綻は、がんで観察される異常な転写ネットワークや、神経発生および幹細胞生物学の研究に関連する発生遺伝子制御の変化に関与することが示唆されています。

MBD3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMBD3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MBD3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MBD3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MBD3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MBD3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MBD3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MBD3の機能に不可欠なMBD3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MBD3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MBD3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMBD3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MBD3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MBD3 HDRプラスミド（h）および MBD3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMBD3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMBD3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。