MATP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404812-ACT

SLC45A2 codifica a MATP (proteína transportadora associada à membrana), um transportador de membrana melanosomal necessário para a síntese normal de melanina e para a biologia dos melanócitos. A MATP ajuda a regular a homeostase iónica dos melanossomas e o pH luminal, processos que influenciam a atividade da tirosinase e a eficiência da produção de eumelanina durante a melanogénese. Alterações na função de SLC45A2 estão associadas a fenótipos de pigmentação e contribuem para formas genéticas de albinismo oculocutâneo, o que reforça a sua relevância para o estudo da biogénese dos melanossomas, do tráfego de proteínas e de vias de stress oxidativo associadas a pigmentos. Em sistemas humanos, SLC45A2 serve como um nó útil para dissecar o controlo transcricional da diferenciação dos melanócitos e os programas de maturação dos melanossomas.

MATP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC45A2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MATP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC45A2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC45A2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MATP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC45A2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MATP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MATP em células tumorais com expressão de SLC45A2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.