MATH-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404019-ACT

NEUROD6 (MATH-2) é um fator de transcrição do tipo hélice–alça–hélice básico (bHLH) que regula programas de comprometimento de linhagem neuronal, diferenciação e maturação durante o neurodesenvolvimento humano. Ao se ligar a motivos E-box, o MATH-2 coordena redes de expressão gênica que controlam o crescimento de neuritos, a função sináptica e a sobrevivência neuronal, integrando-se a cascatas transcricionais do desenvolvimento que moldam os circuitos corticais e hipocampais. A atividade de NEUROD6 está associada a decisões de destino celular e a vias relacionadas à excitabilidade em neurônios, tornando-o relevante para o estudo de mecanismos subjacentes à biologia de doenças do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricas. A perturbação da transcrição regulada por NEUROD6 pode alterar a identidade e a conectividade neuronais, apoiando seu uso na modelagem de redes de regulação gênica em células neurais humanas.

MATH-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NEUROD6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MATH-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NEUROD6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NEUROD6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MATH-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NEUROD6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MATH-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MATH-2 em células tumorais com expressão de NEUROD6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.