MATH-1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-404171-LAC

ATOH1 (MATH-1) codifica um fator de transcrição do tipo hélice-alça-hélice básico (bHLH) que orquestra o comprometimento de linhagem e programas de diferenciação durante o desenvolvimento humano. MATH-1 regula redes gênicas que controlam a neurogênese e decisões de destino de células epiteliais, integrando-se à inibição lateral dependente de Notch, à sinalização Wnt/β-catenina e ao remodelamento de cromatina para especificar os destinos de progenitores. A expressão ou atividade desregulada de ATOH1 tem sido associada a estados de diferenciação alterados e proliferação aberrante em múltiplos contextos teciduais, sustentando seu uso como ponto de entrada molecular para o estudo de circuitos transcricionais ancorados no desenvolvimento. Como um nó em vias determinantes de destino celular, ATOH1 é frequentemente investigado em modelos de especificação de linhagens neurais e sensoriais, homeostase epitelial e reprogramação da identidade celular impulsionada por fatores de transcrição.

As Partículas de Ativação Lentivirais MATH-1 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de ATOH1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais MATH-1 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição ATOH1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de MATH-1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo ATOH1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.