MATH-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419230

Visão geral

Atoh1 (MATH-1) é um fator de transcrição do tipo basic helix–loop–helix que atua como um regulador determinante de linhagem durante o desenvolvimento do camundongo, conduzindo programas de diferenciação neuronal e de células sensoriais. Ele integra sinais de morfógenos e de vias de sinalização a montante, incluindo a inibição lateral mediada por Notch e sinais de padronização associados à via Wnt, para coordenar o comprometimento do destino celular e a maturação. A atividade de Atoh1 é crítica para a especificação e manutenção de células ciliadas mecanossensoriais e de múltiplas populações de progenitores neuronais, ligando-o a vias que controlam a transição de proliferação para diferenciação. A expressão ou função desregulada de Atoh1 tem sido associada a trajetórias neurodesenvolvimentais alteradas e a estados de diferenciação aberrantes relevantes para a modelagem de doenças em tecidos nos quais Atoh1 governa a competência de progenitores.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO MATH-1 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Atoh1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Atoh1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Atoh1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína MATH-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Atoh1 para a investigação da sinalização de MATH-1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Atoh1 críticos para a função MATH-1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Atoh1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo MATH-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo MATH-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Atoh1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo MATH-1 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR MATH-1 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Atoh1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Atoh1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.