Mast Cell Tryptase Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400887-ACT

TPSAB1 codifica a triptase de mastócitos (triptase-α/β), uma protease serina secretada que fica armazenada nos grânulos dos mastócitos e é liberada durante a desgranulação. A triptase de mastócitos participa do remodelamento proteolítico da matriz extracelular e pode sinalizar por meio de receptores ativados por proteases, modulando cascatas inflamatórias, o recrutamento de leucócitos e a permeabilidade vascular. Ao influenciar redes de citocinas e a dinâmica do microambiente tecidual, o TPSAB1 é comumente usado como marcador de ativação e abundância de mastócitos em imunologia e biologia de tecidos de barreira. Alterações na atividade da triptase e nos padrões de infiltração de mastócitos são estudadas em alergia, asma, distúrbios inflamatórios crônicos, processos associados à fibrose e inflamação associada a tumores.

Mast Cell Tryptase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TPSAB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Mast Cell Tryptase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TPSAB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TPSAB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Mast Cell Tryptase. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TPSAB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Mast Cell Tryptase no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Mast Cell Tryptase em células tumorais com expressão de TPSAB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.