Maspin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416693-ACT

O SERPINB5 humano codifica a maspina, um membro não inibitório da família das serpinas, implicado na regulação da adesão de células epiteliais, da motilidade e das interações com a matriz extracelular. A maspina tem sido associada à modulação da ativação do plasminogênio, da sinalização célula–matriz e da dinâmica do citoesqueleto, influenciando processos como invasão, migração e remodelamento tecidual. Sua expressão e localização subcelular são frequentemente alteradas em diferentes tipos de tumor, nos quais a maspina é estudada como um regulador dependente do contexto da progressão tumoral e de fenótipos associados à metástase. Como resultado, o SERPINB5 é amplamente utilizado para investigar vias que conectam diferenciação epitelial, respostas ao estresse e sinais do microambiente na biologia do câncer.

Maspin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SERPINB5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Maspin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SERPINB5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SERPINB5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Maspin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SERPINB5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Maspin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Maspin em células tumorais com expressão de SERPINB5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.