MASP-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402549-ACT

MASP2 codifica a protease serina 2 associada à lectina ligadora de manose (MASP-2), uma protease produzida no fígado que inicia a via das lectinas do sistema complemento após a ligação de moléculas de reconhecimento de padrões, como a MBL e as ficolinas, a glicanos microbianos ou a superfícies próprias alteradas. Após a ativação, a MASP-2 cliva C4 e C2 para gerar a convertase de C3, amplificando a opsonização, a inflamação e a formação subsequente do complexo de ataque à membrana como parte da vigilância imunitária inata. Esta via interage com a coagulação e com a sinalização inflamatória por meio de fragmentos efetores do complemento e de reguladores que modulam o recrutamento de leucócitos e as respostas de lesão tecidual. Alterações na atividade da MASP2 ou variações genéticas têm sido associadas à suscetibilidade a infeções e a estados inflamatórios mediados pelo sistema imunitário, sustentando a sua utilização em estudos mecanísticos de patologia impulsionada pelo complemento.

MASP-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MASP2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MASP-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MASP2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MASP2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MASP-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MASP2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MASP-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MASP-2 em células tumorais com expressão de MASP2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.